【文献速递】CD302可预测接受伊马替尼治疗的CML患者能否获得深度分子学缓解

为了实现TFR，CML患者必须首先达到DMR。此外，成功达到DMR的患者很少出现疾病进展，可能有更高的生存率。有许多因素可以预测能否实现 DMR。例如，在开始治疗的3个月内未能获得早期分子学缓解（EMR）（定义为BCR::ABL1 ≤10% 国际标准[IS]）的患者获得DMR的可能性较低，这突出了EMR、DMR和TFR资格之间的联系。因此，EMR是CML管理共识建议中公认的里程碑。

一线使用更大剂量伊马替尼或更强效的酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）和早期实现主要分子学缓解（MMR；BCR::ABL1 ≤ 0.1% IS）也是DMR的预测因子。然而，需要注意的是，并非所有在12个月前实现MMR的患者都会实现DMR，识别出能够预测DMR的其他因素有助于患者管理。目前，被称为CD的特定细胞表面标记物与DMR之间的关系尚不清楚。CD标记物是一个有吸引力的潜在生物标记物来源，因为它们易于在大多数诊断实验室进行分析。

既往研究表明，免疫控制可能有助于实现分子学缓解。例如，DMR患者的免疫效应因子得到恢复，程序性细胞死亡蛋白 1 (PD-1) 和免疫抑制因子减少。因此，研究人员推测循环细胞上CD标记物的表达可能作为免疫环境的替代指标，从而与DMR的实现有关。本研究旨在使用诊断时测定的CD标记物，识别出5年时获得DMR的概率较低的患者，并确定其与已知CML生物标记物之间的关联。

从纳入TIDEL-II试验（ACTRN12607000325404）的患者采集血样。简言之，慢性期CML患者起始每日服用伊马替尼600 mg。未能实现时间依赖性分子里程碑（与ELN 2013年建立的最佳目标一致）会导致伊马替尼剂量增加到每日800 mg，或转换为尼洛替尼400 mg每日2次。对于伊马替尼不耐受，患者也可转换为尼洛替尼。来自基于伊马替尼的TIDEL-II试验的共119个诊断性外周血单个核细胞（MNC）RNA样本进行转录组微阵列分析。

在评估尼洛替尼有效性和安全性的临床试验-扩展分子缓解（ENESTxtnd，NCT01254188）研究中，慢性期CML患者起始服用尼洛替尼300 mg每日2次，而在CML12 DIRECT试验（ACTRN12616000738426）中，患者每日服用达沙替尼100 mg，并根据达沙替尼谷值进行剂量调整。来自ENESTxtnd样品的总白细胞用于微阵列分析。

表1. 发现和验证队列中的患者特征

图1. 由3个月BCR::ABL1%和CD302高表达定义、识别出的2个不同的PR组

利用验证队列（表1）进一步证实，PR-1（P<0. 00001）和PR-2（P=0.008）较GR在统计学上有显著较低的DMR获得率（0% vs. 29% vs. 78%；图1C-D）。PR-1组（15%）和PR-2组（13%）的规模相似。研究者还证实，CD302单独表达量（不包括3个月BCR::ABL1%）是DMR的预测因子（24% vs. 70%，P<0.001；图1E）。

此外，为了验证CD302基因的蛋白表达，研究者对CD45⁺CML细胞进行流式细胞术分析。分析显示，CD45⁺CML MNCs上CD302基因的表达量和CD302⁺蛋白的表达量之间存在显著相关性（r=0.53，P=0.0001；图1F）。此外，与PR-1组（P=0.018）和GR组（P=0.0007）相比，研究者观察到PR-2组CD45⁺CML细胞上CD302蛋白的表达水平显著较高，这证实了该基因表达的发现（图1G）。

为了更深入地了解与GR组相比，PR-2患者组PR本质背后的驱动因素，研究者评估了CD302与其已发表的CML生物标志物之间的相关性。研究者对与分子缓解相关的ASXL1、BIM和KIR2DL5B常见胚系变异进行了基因型分析。研究者发现，与GR相比，PR-2呈现出更高的KIR2DL5B^POS基因型发生率（P < 0.001；表2）。

表2. 由模型定义的风险组中ASXL1、BIM和KIR2DL5B基因型分析

研究表明，BCR::ABL1（IS）减半时间较长的患者（对应于从基线到3个月时的初始BCR::ABL1%下降速度较慢）的临床结局和分子学缓解获得情况较差。研究者分析了这些组与BCR::ABL1%相关的动态变化。不出所料，与GR相比，PR-1由于在3个月时的BCR::ABL1%水平较高，具有较慢的BCR::ABL1%下降速度或较长的BCR::ABL1减半时间（P<0.001；图2A-B）。在前3个月期间，未观察到PR-2和GR之间的BCR::ABL1%下降速率的显著差异（P=0.54；图2B）。

图2. 伊马替尼治疗下与GR相比，PR-1组的特征

一项研究表明，从3个月到6个月计算的BCR::ABL1转录本的第二下降速率与临床结局有关，但与分子学缓解无关。随后，研究者旨在根据减少量或减半时间的百分比来确定PR-2组和GR组之间第二下降速率是否存在差异。分析揭示了统计学上的显著差异，表明PR-2组BCR::ABL1%从3个月到6个月的减半时间比GR组较长（P = 0.007；图2C）。

图3. CD302的表达主要见于髓细胞而非淋巴细胞

在CML细胞群中检测了CD302蛋白的表达：MNC（CD45⁺）、髓细胞（CD33⁺CD11b⁺）、CD34⁺干/祖细胞、淋巴细胞（CD33⁻CD11b⁻CD3⁺/CD19⁺/CD56⁺）、粒细胞（CD33⁺CD11b⁺CD15⁺）、髓系树突状细胞（mDCs: HLA-DR⁺LIN⁻CD14⁻CD123^−/low）、浆细胞样DC（pDCs: CD123⁺CD303⁺）、单核样髓源性抑制细胞(Mo-MDSC: HLA-DR⁻ LIN⁻ CD33⁺ CD11b⁺ CD66b⁻ CD14⁺) 和单核细胞（CD14⁺）。值得注意的是，在检测的这些细胞群体中，单核细胞（单核细胞，Mo-MDSC）显示出CD302的表达量最高（图3A）。

CD302蛋白在CML CD45⁺细胞和CD302⁺CD33⁺CD11b⁺髓系细胞中的表达之间存在统计学上显著的相关性（r=0.81，P<0.0001；图3B），但与CD3⁺T淋巴细胞之间没有相关性（r=0.1，P=0.49；图3C）。当比较髓系细胞（r=0.39，P=0.007）和淋巴细胞（r=0.03；P=0.82）中的CD302基因表达时，可观察到类似的相关性。此外，与GR组相比，PR-2呈现出更高的表达CD302的髓细胞发生频率（P=0.037；图3D）。重要的是，CD302表达的增加并不是由于PR-2组的髓系绝对计数较高（P=0.39）。相反，PR-2组和GR组之间，表达CD302的淋巴细胞发生频率（P=0.62；图3E）或其绝对计数（P=0.57）没有显著差异。

图4. PR-2在CD14+和CD34+细胞群体中有较高的CD302+蛋白表达